CellROX Deep Red Reagent, for oxidative stress detection

氧化應(yīng)激檢測(cè)用探針（深紅色）

溫馨提示：

見我司（懋康生物）整理的活性氧ROS熒光探針專題。

見我司（懋康生物）整理的CellROX Reagent, for oxidative stress detection氧化應(yīng)激檢測(cè)探針產(chǎn)品專題。

搜索關(guān)鍵詞：

Reactive oxygen species (ROS) 活性氧；DCFH-DA；HPF羥苯基熒光素；Mitosox 線粒體超氧化物探針；Dihydroethidium (DHE) 二氫乙錠；ROSGreenTM H2O2Probe；Life (Molecular Probe)；

訂購信息：

產(chǎn)品描述：

CellROX Deep Red Reagent是一種檢測(cè)活細(xì)胞氧化應(yīng)激的新型熒光探針。此細(xì)胞膜滲透性的染料在還原態(tài)時(shí)無熒光或呈微弱熒光，一旦被活性氧物質(zhì)（ROS）氧化后發(fā)明亮穩(wěn)定的熒光，最大吸收/發(fā)射波長(zhǎng)約~ 644/ 665nm（見圖I.CellROX Deep Red氧化后的熒光光譜圖）。其熒光信號(hào)主要定位在細(xì)胞質(zhì)。CellROX Deep Red Reagent的深紅色熒光信號(hào)與其他活細(xì)胞染料和GFP兼容，使其適用于多重?zé)晒庠囼?yàn)來測(cè)定各種細(xì)胞現(xiàn)象，包括與細(xì)胞毒性和細(xì)胞死亡的參數(shù)。不同于其它的ROS探針，比如H2DCFDA（MX4802-50MG），CellROX Deep Red Reagent的熒光信號(hào)經(jīng)醛類固定后也能保留，使其相對(duì)于傳統(tǒng)的ROS探針來說在應(yīng)用和操作流程更加靈活。CellROX Deep Red Reagent與各種檢測(cè)平臺(tái)兼容，比如傳統(tǒng)熒光顯微鏡、高內(nèi)涵篩選儀器（HCS）、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀或高通量篩選（HTS）。還與各種臺(tái)式儀器兼容，比如Attune™儀器。

圖1. CellROX Deep Red Reagent氧化后的熒光光譜圖

本品以穩(wěn)定、即用型的DMSO溶液形式提供，濃度為2.5mM，操作簡(jiǎn)單，與熒光顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)工作流程兼容。每管染料（50µl）足夠做1個(gè)96孔板或20張爬片。適用于任何細(xì)胞類型的氧化應(yīng)激檢測(cè)。

保存與運(yùn)輸方法

保存：≤-20oC避光保存，保持干燥，1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1. 本品對(duì)光和空氣敏感，使用過程中切記不可長(zhǎng)時(shí)間敞開瓶蓋。當(dāng)瓶子開口后建議丟掉未用完的材料。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 需要自行準(zhǔn)備的材料

1. 細(xì)胞和培養(yǎng)基

2. 生理鹽緩沖液（PBS，pH 7.2-7.6）

3. 【可選】固定劑（比如，溶于PBS的3.7%甲醛）

1. 
   

2. 實(shí)驗(yàn)步驟

以下步驟專門為BPAE，HepG2, U-2 OS和RAW巨噬細(xì)胞所開發(fā)，優(yōu)化后的染色工作濃度為5µM，但是此實(shí)驗(yàn)適用于任何細(xì)胞類型。生長(zhǎng)培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、細(xì)胞類型變化和其他因素可能會(huì)影響標(biāo)記效率。在初始實(shí)驗(yàn)，建議設(shè)置濃度梯度，以確定的實(shí)驗(yàn)條件和適合研究細(xì)胞類型的工作濃度。

CellROX Deep RedReagent對(duì)光和空氣敏感，使用過程中切記不可長(zhǎng)時(shí)間敞開瓶蓋。當(dāng)瓶子開口后建議丟掉未用完的材料。

1. 用待測(cè)化合物或藥物處理細(xì)胞，孵育一定時(shí)間。【注】：待測(cè)化合物或藥物處理后沒有必要去除培養(yǎng)基。

2. 加CellROX Deep RedReagent到細(xì)胞內(nèi)使其終濃度為5µM，37℃孵育30min。

3. 去除培養(yǎng)基，用PBS清洗3次。

4. 【可選】可用3.7%甲醛固定細(xì)胞15min。需在CellROX Deep RedReagent染色2h內(nèi)進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)。

5. 【可選】此時(shí)可用NucBlue活細(xì)胞染料（一種細(xì)胞核復(fù)染劑）或其他復(fù)染劑如Hoechst 33342（CAT#：MX4204-10ML）對(duì)細(xì)胞染色。

應(yīng)用示例

圖II. CellROX Deep RedReagent測(cè)定牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（BPAE）的氧化應(yīng)激水平。在96孔板內(nèi)接種BPAE細(xì)胞。之后用含維生suK3（100µM）或不含維生suK3的培養(yǎng)基37℃處理1h【在孵育的后30min時(shí)向某些對(duì)照和維生suK3處理孔內(nèi)加入超氧化物清除劑MnTBAP（100µM）】。之后細(xì)胞用CellROX Deep RedReagent（5µM）和Hoechst 33342染色，將探針加入完quan培養(yǎng)基內(nèi)37℃孵育30min。細(xì)胞經(jīng)PBS清洗后，之后成像檢測(cè)。

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——Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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